Жасуша культурасының негізгі артықшылықтарының бірі - жасуша көбеюінің физикалық химиясын (яғни температура, рН, осмостық қысым, O2 және CO2 кернеуі) және физиологиялық ортаны (яғни гормондар мен қоректік заттардың концентрациясын) басқару мүмкіндігі.Температурадан басқа культура ортасы өсу ортасымен бақыланады.
Дақылдың физиологиялық ортасы оның физикалық және химиялық ортасы сияқты анық болмаса да, сарысу компоненттерін жақсы түсіну, көбеюге қажетті өсу факторларын анықтау және культурадағы жасушалардың микроортасын жақсы түсіну.(яғни жасуша-клетканың өзара әрекеттесуі, газ диффузиясы, матрицамен әрекеттесу) енді белгілі бір жасуша линияларын сарысусыз ортада өсіруге мүмкіндік береді.
1.Культуралық орта жасушаның өсуіне әсер етеді
Жасуша культурасының шарттары әр жасуша түрі үшін әртүрлі екенін ескеріңіз.
Белгілі бір жасуша түріне қажетті культура шарттарынан ауытқудың салдары анормальды фенотиптердің экспрессиясынан жасуша дақылының толық сәтсіздігіне дейін ауытқиды.Сондықтан, сізді қызықтыратын ұяшық сызығымен танысып, тәжірибеңізде пайдаланатын әрбір өнім үшін берілген нұсқауларды қатаң түрде орындауды ұсынамыз.
2.Жасушаларыңыз үшін оңтайландырылған жасуша культурасының ортасын жасау бойынша сақтық шаралары:
Мәдени орта және сарысу (қосымша ақпаратты төменде қараңыз)
pH және CO2 деңгейлері (қосымша ақпаратты төменде қараңыз)
Пластмасса өсіріңіз (қосымша ақпаратты төменде қараңыз)
Температура (қосымша ақпаратты төменде қараңыз)
2.1 Мәдени орта және сарысу
Қоректік орта қоректік заттармен, өсу факторларымен және жасушалардың өсуіне қажетті гормондармен қамтамасыз ететіндіктен, дақылдың рН және осмостық қысымын реттейтіндіктен культура ортасының ең маңызды бөлігі болып табылады.
Жасуша культурасының бастапқы эксперименттері ұлпа сығындылары мен дене сұйықтықтарынан алынған табиғи орталарды қолдану арқылы жүргізілгенімен, стандарттау қажеттілігі, медиа сапасы және сұраныстың артуы түпкілікті ортаның дамуына әкелді.Ортаның үш негізгі түрі – базальды орта, төмендетілген сарысу ортасы және сарысусыз орта және олардың сарысуды толықтыруға қойылатын талаптары әртүрлі.
2.1.1 Негізгі орта
Гибко жасушасының қоректік ортасы
Жасуша линияларының көпшілігі аминқышқылдары, витаминдер, бейорганикалық тұздар және көміртек көздері (мысалы, глюкоза) бар негізгі орталарда жақсы өседі, бірақ бұл негізгі орта құрамдары сарысумен толықтырылуы керек.
2.1.2 Азайтылған сарысу ортасы
Gibco төмен сарысуы бар бөтелке
Жасуша культурасының эксперименттерінде сарысудың жағымсыз әсерін азайтудың тағы бір стратегиясы сарысуы азайған ортаны пайдалану болып табылады.Азайтылған сарысу ортасы – қоректік заттарға және жануарлардан алынатын факторларға бай негізгі орта формуласы, қажетті сарысу мөлшерін азайтуы мүмкін.
2.1.3 Сарысусыз орта
Gibco сарысусыз ортасы бар бөтелке
Сарысусыз орта (SFM) сарысуды сәйкес қоректік және гормондық құрамдармен ауыстыру арқылы жануарлар сарысуын пайдалануды айналып өтеді.Көптеген бастапқы дақылдар мен жасуша линияларында сарысусыз орта құрамдары бар, соның ішінде қытай хомякының аналық безінің (CHO) рекомбинантты протеин өндіру желісі, әртүрлі гибридома жасушаларының желілері, жәндіктердің Sf9 және Sf21 (Spodoptera frugiperda), сондай-ақ вирус өндіруге арналған хост үшін. (мысалы, 293, VERO, MDCK, MDBK) және т.б. Сарысусыз ортаны пайдаланудың негізгі артықшылықтарының бірі өсу факторларының сәйкес комбинациясын таңдау арқылы ортаны нақты жасуша түрлері үшін таңдаулы ету мүмкіндігі болып табылады.Келесі кестеде сарысусыз медианың артықшылықтары мен кемшіліктері келтірілген.
Артықшылық
Айқындықты арттырыңыз
Тұрақты өнімділік
Оңай тазарту және төменгі ағынды өңдеу
Жасушаның қызметін нақты бағалау
Өнімділікті арттыру
Физиологиялық реакцияларды жақсырақ бақылау
Жетілдірілген ұялы медианы анықтау
Кемшілігі
Ұяшық түріне арнайы орта формуласына қойылатын талаптар
Жоғары реагент тазалығы қажет
Өсудің баяулауы
2.2.1 рН деңгейі
Сүтқоректілердің қалыпты жасушаларының көпшілігі рН 7,4-те жақсы өседі және әртүрлі жасуша сызықтары арасындағы айырмашылықтар аз.Дегенмен, кейбір трансформацияланған жасуша линиялары сәл қышқыл ортада (рН 7,0 – 7,4) жақсы өсетіні көрсетілген, ал кейбір қалыпты фибробласт жасушаларының линиялары сәл сілтілі ортаны (рН 7,4 – 7,7) қалайды.Sf9 және Sf21 сияқты жәндіктердің жасушалары рН 6,2 деңгейінде жақсы өседі.
2.2.2 CO2 деңгейі
Өсу ортасы культураның рН деңгейін бақылайды және рН өзгеруіне қарсы тұру үшін культурадағы жасушаларды буферлейді.Әдетте, бұл буферлеуге құрамында органикалық (мысалы, HEPES) немесе СО2-бикарбонат негізіндегі буферлер арқылы қол жеткізіледі.Ортаның рН мәні еріген көмірқышқыл газы (СО2) мен бикарбонаттың (HCO3-) нәзік тепе-теңдігіне байланысты болғандықтан, атмосфералық СО2-нің өзгеруі ортаның рН-ын өзгертеді.Сондықтан СО2-бикарбонат негізіндегі буфермен буферленген ортаны пайдаланған кезде, әсіресе ашық культуралық ыдыстарда жасушаларды өсіргенде немесе жоғары концентрацияда трансформацияланған жасуша линияларын өсіргенде, экзогендік СО2 пайдалану қажет.Көптеген зерттеушілер әдетте ауада 5-7% СО2 пайдаланғанымен, жасуша культурасының эксперименттерінің көпшілігі әдетте 4-10% CO2 пайдаланады.Дегенмен, әрбір ортада дұрыс рН және осмостық қысымға қол жеткізу үшін ұсынылған CO2 кернеуі және бикарбонат концентрациясы бар;қосымша ақпарат алу үшін орта өндірушінің нұсқауларын қараңыз.
2.3 Пластмассаларды өсіру
Жасуша культурасына арналған пластмассалар әртүрлі пішіндерде, өлшемдерде және беттерде әртүрлі жасуша культурасына сәйкес келеді.Жасуша культурасын қолдану үшін дұрыс пластикті таңдауға көмектесу үшін төмендегі ұяшық культурасының пластмасса бетінің нұсқаулығын және жасуша культурасына арналған контейнер нұсқаулығын пайдаланыңыз.
Барлық Thermo Scientific Nunc жасуша культурасының пластиктерін қараңыз (жарнама сілтемесі)
2.4 Температура
Жасуша өсіру үшін оңтайлы температура көп дәрежеде жасушалар оқшауланған иесінің дене температурасына және аз дәрежеде температураның анатомиялық өзгерістеріне байланысты (мысалы, терінің температурасы қаңқа бұлшықетінің температурасынан төмен болуы мүмкін). ).Жасуша мәдениеті үшін қызып кету қызып кетуден гөрі маңызды мәселе болып табылады.Сондықтан инкубатордағы температура әдетте оңтайлы температурадан сәл төмен орнатылады.
2.4.1 Әртүрлі жасуша желілері үшін оңтайлы температура
Адам мен сүтқоректілердің жасушаларының көпшілігі оңтайлы өсу үшін 36 ° C-тан 37 ° C-қа дейін сақталады.
Жәндіктердің жасушалары оңтайлы өсу үшін 27 ° C температурада өсіріледі;олар төмен температурада және 27°C және 30°C аралығындағы температурада баяу өседі.30°С-тан жоғары жәндіктер жасушаларының өміршеңдігі төмендейді, 27°С-қа оралса да, жасушалар қалпына келмейді.
Құс жасушаларының линиялары максималды өсуге жету үшін 38,5 ° C қажет.Бұл жасушаларды 37 ° C температурада ұстауға болатынына қарамастан, олар баяу өседі.
Суық қанды жануарлардан (мысалы, қосмекенділер, суық судағы балықтар) алынған жасуша желілері 15 ° C-тан 26 ° C-қа дейінгі кең температура диапазонына шыдай алады.
Жіберу уақыты: 01 ақпан 2023 ж