Жасуша дақылдарының ластануы, кейде өте ауыр зардаптарды тудыратын, жасуша культурасының зертханаларында жиі кездесетін мәселеге айналуы мүмкін.Жасуша культурасының ластаушыларын екі санатқа бөлуге болады: орта, сарысу және су қоспалары, эндотоксиндер, пластификаторлар және жуғыш заттар сияқты химиялық ластаушылар және бактериялар, зеңдер, ашытқылар, вирустар, микоплазмалар инфекциясы арқылы өтетін биологиялық ластаушылар.Басқа жасуша желілерімен ластанған.Ластануды толығымен жою мүмкін болмаса да, оның жиілігі мен ауырлығын оның көзін мұқият түсіну және жақсы асептикалық әдістерді сақтау арқылы азайтуға болады.
1. Бұл бөлімде биологиялық ластанудың негізгі түрлері көрсетілген:
Бактериялық ластану
Зең және вируспен ластану
Микоплазманың ластануы
Ашытқымен ластану
1.1 Бактериялық ластану
Бактериялар – бір жасушалы микроорганизмдердің барлық жерде кездесетін үлкен тобы.Олардың диаметрі әдетте бірнеше микронды құрайды және шарлардан шыбықтар мен спиральдарға дейін әртүрлі пішінде болуы мүмкін.Бактериялар, олардың барлық жерде болуы, көлемі және жылдам өсу жылдамдығына байланысты ашытқылар мен зеңдермен бірге жасуша дақылында ең көп таралған биологиялық ластаушылар болып табылады.
1.1.1 Бактериялық ластануды анықтау
Бактериялық ластану дақылды жұқтырғаннан кейін бірнеше күн ішінде визуалды тексеру арқылы оңай анықталады;
Жұқтырған дақылдар әдетте бұлтты (яғни, бұлыңғыр), кейде бетінде жұқа қабықпен көрінеді.
Қоректік ортаның рН-ның кенеттен төмендеуі де жиі кездеседі.
Төмен қуатты микроскоптың астында бактериялар жасушалар арасында қозғалатын кішкентай түйіршіктер болып көрінеді, ал жоғары қуатты микроскоппен бақылау жеке бактериялардың пішіндерін шеше алады.
1.2 Зең және вирустың ластануы
1.2.1 Зеңнің ластануы
Зеңдер - гифа деп аталатын көп жасушалы жіптер түрінде өсетін саңырауқұлақтар патшалығының эукариоттық микроорганизмдері.Бұл көп жасушалы жіптердің дәнекер желілерінде колониялар немесе мицелий деп аталатын генетикалық жағынан бірдей ядролар болады.
Ашытқылардың ластануы сияқты, культураның рН деңгейі ластанудың бастапқы кезеңінде тұрақты болып қалады, содан кейін культура қатты жұқтырған және бұлыңғыр болған сайын тез артады.Микроскоппен қарағанда мицелий әдетте жіп тәрізді, кейде споралардың тығыз шоғырлары түрінде болады.Көптеген зеңдердің споралары тыныштық кезеңінде өте қатал және қолайсыз ортада өмір сүре алады және дұрыс өсу жағдайлары кездескен кезде ғана белсендіріледі.
1.2.2 Вирустардың ластануы
Вирустар – микроскопиялық жұқпалы қоздырғыштар, олар жасушаның көбеюі үшін механизмдерді алады.Олардың өте кішкентай мөлшері оларды культурада анықтауды және жасуша культурасы зертханаларында қолданылатын реагенттерден шығаруды қиындатады.Көптеген вирустар иелеріне өте қатаң талаптар қоятындықтан, олар әдетте иесінен басқа түрлердің жасуша дақылдарына теріс әсер етпейді.
Дегенмен, вирус жұқтырған жасуша дақылдарын пайдалану, әсіресе адам немесе примат жасушалары зертханада өсірілетін болса, зертхана қызметкерлерінің денсаулығына елеулі қауіп төндіруі мүмкін.
Жасуша дақылдарындағы вирустық инфекцияны электронды микроскопия, антиденелер жиынтығымен иммундық бояу, ИФА немесе тиісті вирустық праймерлермен ПТР арқылы анықтауға болады.
1.3 Микоплазманың ластануы
Микоплазмалар - жасуша қабырғалары жоқ қарапайым бактериялар және олар өзін-өзі репликациялайтын ең кішкентай организмдер болып саналады.Өте кішкентай мөлшеріне байланысты (әдетте 1 микроннан аз) микоплазманы олар өте жоғары тығыздыққа жеткенше және жасуша дақылдарының нашарлауына әкелмейінше анықтау қиын;Осы уақытқа дейін әдетте инфекцияның айқын белгілері болмайды.
1.3.1 Микоплазманың ластануын анықтау
Кейбір баяу өсетін микоплазмалар дақылдарда жасуша өлімін тудырмай сақталуы мүмкін, бірақ олар дақылдардағы хост жасушаларының мінез-құлқы мен метаболизмін өзгертеді.
Созылмалы микоплазмалық инфекция жасуша пролиферациясының төмендеуімен, қанығу тығыздығының төмендеуімен және суспензия дақылында агглютинациямен сипатталуы мүмкін.
Дегенмен, микоплазманың ластануын анықтаудың жалғыз сенімді жолы - флуоресцентті бояу (мысалы, Hoechst 33258), ELISA, ПТР, иммундық бояу, авторрадиография немесе микробтық тестілеу арқылы мәдениетті жүйелі түрде сынау.
1.4 Ашытқымен ластану
Ашытқылар саңырауқұлақтар патшалығының бір жасушалы эукариоттары болып табылады, олардың мөлшері бірнеше микроннан (әдетте) 40 микронға дейін (сирек).
1.4.1 Ашытқылардың ластануын анықтау
Бактериялық ластану сияқты, ашытқымен ластанған дақылдар бұлтты болуы мүмкін, әсіресе ластану жоғары сатыда болса.Ашытқымен ластанған дақылдардың рН деңгейі ластану күшейгенше өте аз өзгереді, бұл кезеңде рН әдетте жоғарылайды.Микроскоптың астында ашытқылар жеке жұмыртқа тәрізді немесе сфералық бөлшектер түрінде көрінеді және кішірек бөлшектерді тудыруы мүмкін.
2. Айқас инфекция
Микробтық ластану сияқты кең таралған болмаса да, көптеген жасуша линияларының HeLa және басқа да тез өсетін жасуша линияларымен кең көлемді ластануы ауыр зардаптары бар нақты анықталған мәселе болып табылады.Белгілі ұяшық банктерінен жасуша желілерін алыңыз, жасуша линияларының сипаттамаларын үнемі тексеріп отырыңыз және жақсы асептикалық әдістерді қолданыңыз.Бұл тәжірибелер айқас ластанудан аулақ болуға көмектеседі.ДНҚ саусақ ізін анықтау, кариотиптеу және изотиптеу сіздің жасуша мәдениетіңізде айқаспалы ластану бар-жоғын растай алады.
Микробтық ластану сияқты кең таралған болмаса да, көптеген жасуша линияларының HeLa және басқа да тез өсетін жасуша линияларымен кең көлемді ластануы ауыр зардаптары бар нақты анықталған мәселе болып табылады.Белгілі ұяшық банктерінен жасуша желілерін алыңыз, жасуша линияларының сипаттамаларын үнемі тексеріп отырыңыз және жақсы асептикалық әдістерді қолданыңыз.Бұл тәжірибелер айқас ластанудан аулақ болуға көмектеседі.ДНҚ саусақ ізін анықтау, кариотиптеу және изотиптеу сіздің жасуша мәдениетіңізде айқаспалы ластану бар-жоғын растай алады.
Жіберу уақыты: 01 ақпан 2023 ж